Spark多功能酶标仪

细胞计数、分析细胞活力并且测定细胞大小分布是许多学科研究人员的常规工作，包括下游实验的标准细胞系传代，使用感染杆状病毒的昆虫细胞来生产重组蛋白，或测定干细胞的分化能力。

Tecan的Spark多功能酶标仪具有明场细胞成像模块。该模块可通过操作简便的一次性Cell Chip™进行无标记细胞计数、大小分布测定和基于台盼蓝的细胞活力分析。每个细胞芯片适配器可以装载四个细胞芯片（图1），一个细胞芯片有两个样品室，因此在一次测量运行中可以分析多达八个样品，且时间不到1分45秒。SparkControl ™ 软件中预设的一键式应用程序简化了用户日常工作中的细胞计数和细胞活性分析流程。
 

原理

Spark

对细胞浓度、细胞活力和大小分布进行分析？

台盼蓝测定细胞活力

最早最常见的细胞活力测定的方法之一是台盼蓝排斥试验。台盼蓝不能渗透入完整细胞膜，只能进入细胞膜受损的细胞。在受损细胞内，台盼蓝与胞内的蛋白质结合，使细胞呈蓝色。该检测方法可以直接识别和统计给定细胞群中的活细胞（未染色）和死细胞（蓝色）（图2）。SparkSpark多功能酶标仪提供了台盼蓝排除测定的直接自动化模式，一键便可细胞计数和分析细胞活力。

 

SparkControl软件中使用的轮廓算法能够再现每个细胞的细胞膜轮廓。当计数完成时，每个活细胞会生成一个绿色轮廓，每个死细胞则生成一个红色轮廓。这种复杂的算法可以对目标细胞群体进行一致的识别，并提供准确可靠的细胞数量、浓度、活力分析和大小测量。大多数细胞类型可以使用系统默认的设置进行分析，用户可以轻松修改默认设置以确保结果准确。该软件还可以计算用户设定的大小范围内的细胞数量。

方法

Spark

帮助确定重组蛋白的最佳表达时间：

使用昆虫细胞来生产重组蛋白，用重组杆状病毒将重组蛋白的特异性编码基因引入细胞中。根据Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的实验方案进行病毒载体的生成。即用病毒原液感染每毫升含有1×10⁶个细胞的细胞悬液，通常比例为1:100 v/v。随后在感染的72小时内，每24小时记录一次细胞活性和细胞大小。
 

结果

使用最常见的昆虫细胞系之一的Sf21来验证感染后72小时的蛋白质生产水平。


在图3中，左侧的照片显示了未感染细胞平均直径为14µm（图3A）。活细胞通过绿色条线显示在细胞直径直方图中。感染重组杆状病毒后，Sf21细胞直径增大。这个读数被用来定义最佳表达时间。感染后48小时，细胞的平均直径为18μm（图3B），进一步表达后细胞的平均直径则增至20μm（图3C）。